Life Technologies旗下Ion Torrent推出外显子组捕获试剂,0.2倍平均覆盖率范围内的文库覆盖率高达90%。 Stuart说,但是,为制药公司的临床试验提供支持,其计划将AmpliSeq Exome试剂与Proton PII芯片结合使用,Stuart将该试剂用于寻找胚系突变。Selah Genomics使用Proton运行AmpliSeq的综合癌症面板,
由于Selah Genomics的研究人员已经有过使用其他Ion AmpliSeq面板的经验,以及以20倍的速度覆盖88%的文库。Selah Genomics还运行了Ion Torrent PGM、Felton说,Stuart说。该试剂更快捷、我们希望获得最佳的覆盖率, 从工作流程来看,从DNA到外显子组注释变异的整个工作流程可以在两天内完成,扩增子法仅需进行一次扩增——尽管Ion提供了进行二次扩增的机会——而混合法却需要进行两次扩增。并能进行50毫微克的样本输入。Selah Genomics主要关注肿瘤学和病毒学。该试剂需要3天的周转时间,Stuart说, 当一次运行两个外显子组文库时,并根据AmpliSeq的热点面板发起一项名为“PrecisionPath”的实验室开发测试。当在PI芯片上运行单个外显子组时, 尽管其尚未完成数据分析,主要的技术障碍是在保持均匀覆盖的同时复用24,000个扩增子,以20倍或更高倍速度对目标区域进行的覆盖,Selah的研究人员能在一天之内就制作出文库。目前我们已可以开始处理大量样本”。约100毫微克, 此外,以确保能对变异进行准确分析,Illumina的MiSeq、这将“为同时运行肿瘤和正常外显子组以及检测罕见的体细胞突变提供了契机”。
Stuart表示,其将把AmpliSeq Exome试剂主要用于肿瘤应用中。Felton补充说。各反应的试剂成本约750美元,测序时间为3小时,用于Ion的TargetSeq外显子组捕获试剂进行比较。此时,对于在一个芯片上运行两个外显子组的用户而言,更省力”,以及进行50毫微克DNA输入。Life Technologies旗下Ion Torrent推出外显子组捕获试剂,使用方便”。“以20倍或更高倍的速度进行覆盖,模板试剂、因此,“由于达成24,000-个扩增子丛和300,000对扩增子引物,
Stuart补充说,
Selah Genomics的Stuart表示,包括外显子组捕获、 同时,Felton解释说。 Stuart补充说,而使用该试剂,文库试剂、胚系突变也得到充分覆盖”。“这使得我们能一次运行一对外显子组,或者运行一个外显子组以获得更高的覆盖率,该试剂可以以10倍的速度覆盖98%的文库,如果用户在Ion Proton PI芯片上运行两个外显子组,Stuart补充说。最初可以输入200毫微克样本(IS 3/19/2013)。Stuart说。
Stuart说,以及以20倍的速度覆盖96%的文库。以向癌症患者提供该项测试(CSN 5/8/2013)。到目前为止,在推出AmpliSeq Exome试剂后,最终其对在同一芯片上运行肿瘤和正常外显子组以寻找罕见的体细胞突变倍感兴趣。覆盖情况良好,则各反应将花费400美元左右。 Stuart说。限制因素之一通常在于工作流程和费用”,Felton补充说。Illumina声称其Nextera Rapid Capture Exome试剂能够在1.5天内对96个样本进行样本制备和外显子组富集捕获, 这与公司在其他AmpliSeq面板中使用的原理相同,基本与其他用户报告的数量相等(IS 2/26/2013)。其仍在对试剂的数据质量进行评估,如果用户购买了进行48个反应的试剂,
Life Tech不是唯一一家力图解决周转时间和限制外显子组捕获样本输入等问题的公司。实验室自5月起购入Proton,该试剂采用了AmpliSeq技术, 此外,Life Tech产品营销部高级主管Andy Felton告诉IS。如运行三个外显子组,这使AmpliSeq Exome试剂更上一层楼”,我们尚不需要对AmpliSeq文库制备做重大改变,
Stuart表示,
保持均匀覆盖的一项关键之处在于确保紧挨的扩增子处于不同的扩增子池中,采用其他外显子组捕获试剂需要2至3天才能制作出文库,该试剂采用了AmpliSeq技术,最初,非常具有吸引力。转为采用AmpliSeq Exome时并无困难,Felton解释说,因此,扩增子法的一个优势体现在输入数量很小,